显微知识：细菌的培养（上）

细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定。

本文主要为大家介绍细菌的培养技术相关知识，因内容较多分为上、下两篇文章。

培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。

只含有细菌生长所需的最基本营养成分，应用最广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。

在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。

利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。

培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。

专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。

为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良 Kagan氏培养基等。

制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整 pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。

细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。细菌检验室的注意事项如下：

细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。

用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。

从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上通过2～3次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。

如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用3％来苏水或5％石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡30分种。

工作完毕后，用紫外光灯照射30分钟，或用3％来苏水擦拭台面，并清洗双手。

在微生物学中，接种是将细菌添加到培养基中以便它们在那里繁殖的过程。为了提高对某种疾病的免疫力，经常将疫苗、血清或其他抗原物质引入体内。

接种环和接种针是手持式紧凑型器具，可在孵育、繁殖或生长之前将细菌或酵母等微生物引入平板或管状生长培养基中。接种物通常被输送和传播到液体培养基中，划线到或刺入固体琼脂培养基，或两者兼而有之。

接种环和接种针由三部分组成，即环（针）部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种针通常选用电热（镍）丝，环的直径随使用目的而不同，一般多为2～4mm，环和针的长度为40～50mm。

接种环（针）使用前后均应进行灭菌处理。将接种环（针）末端直立火焰中，烧红镍丝部分，再使接种环（针）金属柄旋转通过火焰3次灭菌，冷却后用以取菌或待试标本。

使用接种环（针）完毕后立即将染菌的镍丝部分于还原焰（内焰）中加热，烤干环（针）端附着的细菌或标本，以免环（针）上残余的细菌或标本因突受高热，爆烈四溅，而污染环境和导致传染危险。然后再移于氧化焰（外焰）中烧红灭菌，最后将金属柄部分往复在火焰中通过3次。用完后的接种环（针），应立即搁置于架上，切勿随手弃置，以免灼焦台面或其他物件。

为避免在接种过程中污染环境以及空气中的细菌污染培养物，接种均应在接种罩或无菌室内进行。此外细菌学实验室所必需的设备还包括无菌工作台、生物安全柜和生物安全实验室。

接种罩的式样很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有机玻璃制成。接种罩在用前先以3％石炭酸或来苏轻拭，内需装有紫外线杀菌灯，用前可先行照射，以保证罩内无尘埃和细菌。操作结束后，应立即清理内部，并作罩内消毒处理。

又称超净工作台（super clean bench），目前多采用垂直层流的气流形式。通过变速离心风机将负压箱内经过预滤器过滤的空气压入静压箱，再经高效过滤器进行二级过滤，从出风面吹出的洁净气流，以一定的和均匀的断面风速通过工作区时，将尘埃颗粒和微生物颗粒带走，从而形成无尘无菌的工作环境。使用时应提前50分钟打开紫外线杀菌灯，30分钟后关闭并启动送风机。净化区内严禁存放不必要的物件，以保持洁净气流型不受干扰。

无菌室又称洁净室（clean room），是在实验室内部安装的用于无菌操作的小室。室内应有空气过滤装置、紫外线杀菌灯等。

目前微生物试验中多采用生物安全柜，是为操作原代培养物、菌（毒）株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的负压过滤排风柜。

生物安全实验室（Biosafety Laboratory），简称“BSL实验室”。指通过规范的实验设计、实验设备的配置、个人防护装备的使用等建造的实验室。在结构上由一级防护屏障（安全设备）和二级防护屏障（设施）构成，实验室生物安全防护的安全设备和设施的不同组合，构成了四级生物安全防护水平，一级为最低。